Циркулирующие опухолевые клетки

Циркулирующие опухолевые клетки ( ЦТК) - это клетки, которые выделяются в сосудистую сеть или лимфатическую систему из первичной опухоли и переносятся по всему организму в кровообращении. CTCs представляют собой очагидля последующего роста дополнительных опухолей ( метастазов) в отдаленных органах, механизм, который ответственен за подавляющее большинство смертей, связанных с раком. Обнаружение и анализ CTCs может помочь ранним прогнозам пациента и определить соответствующие индивидуальные методы лечения.

КТК были впервые обнаружены в 1869 году в крови человека с метастатическим раком Томаса Эшворта, который предположил, что «клетки, идентичные клеткам самого рака, обнаруживаемым в крови, могут иметь тенденцию проливать некоторый свет на способ происхождения множественных опухолей, существующих у одного человека ". Тщательное сравнение морфологии циркулирующих клеток с опухолевыми клетками из разных очагов поражения привело Эшворта к выводу, что «одно можно сказать наверняка: если они [CTC] произошли от существующей структуры рака, они должны были пройти через большую часть системы кровообращения».

Значение CTCs в современных исследованиях рака началось в середине 1990-х годов с демонстрации того, что CTCs существуют на ранних стадиях заболевания. Эти результаты стали возможными благодаря исключительно чувствительной технологии магнитной сепарации с использованием феррофлюидов (коллоидных магнитных наночастиц) и магнитных сепараторов с высоким градиентом, изобретенных Полом Либерти и основанных на теоретических расчетах Либерти и Леона Терстаппена, которые показали, что очень маленькие опухоли выделяют клетки менее чем при 1,0% в день должно привести к обнаружению клеток в крови. С тех пор для подсчета и идентификации КТК применяются различные другие технологии.

Современные исследования рака показали, что CTCs происходят от клонов в первичной опухоли, подтверждая замечания Эшворта. Значительные усилия, приложенные для понимания биологических свойств ЦОК, продемонстрировали критическую роль циркулирующих опухолевых клеток в метастатическом распространении рака. Кроме того, высокочувствительный одноклеточный анализ продемонстрировал высокий уровень гетерогенности, наблюдаемый на уровне отдельных клеток как для экспрессии белка, так и для локализации белка, а CTCs отражали как первичную биопсию, так и изменения, наблюдаемые в метастатических сайтах.,

Биопсия ткани является плохой диагностической процедурой: она инвазивна, не может использоваться повторно и неэффективна для понимания риска метастазирования, прогрессирования заболевания и эффективности лечения. Таким образом, КТК можно рассматривать как «жидкую биопсию», которая выявляет метастазы в действии, предоставляя живую информацию о состоянии болезни пациента. Анализ образцов крови обнаружил склонность к увеличению выявления CTC по мере прогрессирования заболевания у отдельных пациентов. Анализы крови просты и безопасны для выполнения, и многократные образцы могут быть взяты в течение долгого времени. Напротив, анализ солидных опухолей требует инвазивных процедур, которые могут ограничивать соблюдение пациентом режима лечения. Возможность контролировать прогрессирование заболевания с течением времени может облегчить соответствующую модификацию терапии пациента, потенциально улучшая ее прогноз и качество жизни. Важным аспектом способности прогнозировать дальнейшее развитие заболевания является устранение (по крайней мере временно) необходимости операции, когда количество повторных CTC низкое и не увеличивается; Очевидные преимущества избегания хирургического вмешательства включают в себя предотвращение риска, связанного с врожденной опухолью-типичностью раковых операций. С этой целью,

Типы

  1. Традиционные CTC - это подтвержденные раковые клетки с интактным жизнеспособным ядром; экспрессировать цитокератины, которые демонстрируют эпителиальное происхождение; имеют отсутствие CD45, что указывает на то, что клетка не имеет гематопоэтического происхождения; и часто это более крупные клетки с неправильной формой или субклеточной морфологией.
  2. Цитокератин-негативные (CK-) CTC представляют собой раковые стволовые клетки или клетки, подвергающиеся эпителиально-мезенхимальному переходу (EMT). CK-CTCs могут быть наиболее устойчивыми и наиболее склонными к метастазированию; не экспрессируют ни цитокератины, ни CD45; иметь морфологию, сходную с раковой клеткой; и важно иметь экспрессию генов или белков или геномику, связанную с раком.
  3. Апоптотические CTCs являются традиционными CTCs, которые подвергаются апоптозу (гибели клеток): технология Epic Sciences идентифицирует фрагментацию ядра или цитоплазматический блеббинг, связанный с апоптозом. Измерение соотношения традиционных CTC к апоптотическим CTCs - от исходного уровня до терапии - дает представление об эффективности терапии в нацеливании и уничтожении раковых клеток.
  4. Небольшие CTCs являются цитокератиновыми и CD45-отрицательными, но имеют размеры и форму, сходные с лейкоцитами. Важно отметить, что маленькие CTCs имеют специфичные для рака биомаркеры, которые идентифицируют их как CTCs. Маленькие CTCs были вовлечены в прогрессирующее заболевание и дифференциацию в мелкоклеточный рак, который часто требует другого терапевтического курса.

CTC кластеры

Кластеры CTC - это два или более отдельных CTC, связанных вместе. Кластер CTC может содержать традиционные, маленькие или CK-CTC. Эти кластеры имеют специфичные для рака биомаркеры, которые идентифицируют их как CTCs. В нескольких исследованиях сообщается, что наличие этих кластеров связано с повышенным метастатическим риском и плохим прогнозом. Например, одно исследование с участием рака предстательной железы показало в восемь раз более высокую среднюю выживаемость для пациентов с единственными CTCs по сравнению с пациентами с кластерами CTC, в то время как другие исследования показали аналогичные корреляции для рака толстой кишки. Кроме того, перечисление кластеров CTC может предоставить полезную прогностическую информацию для пациентов с уже повышенными уровнями CTC.

Тем не менее, одно исследование сообщило, что вопреки существующему консенсусу, по крайней мере, дискретная популяция этих кластеров не является злокачественной и вместо этого происходит из эндотелий опухоли. Эти циркулирующие опухоль-эндотелиальные кластеры также показывают эпителиально-мезенхимальные маркеры, но не отражают генетику первичной опухоли.

Ранее предполагалось, что кластеры СТС не могут проходить через узкие сосуды, такие как капилляры, из-за их общего размера. Тем не менее, было показано, что кластеры CTC могут «раскручиваться» посредством «селективного расщепления межклеточных спаек», чтобы пересечь эти сужения в одном файле, а затем полностью изменить процесс после очистки. Такое поведение может быть фактором, объясняющим, почему кластеры CTC имеют такой значительный метастатический потенциал.

Частота

Рисунок 1: количество клеток различных клеток крови в цельной крови по сравнению с CTC

Обнаружение CTCs может иметь важные прогностические и терапевтические последствия, но поскольку их количество может быть очень маленьким, эти клетки нелегко обнаружить. Подсчитано, что среди клеток, отделившихся от первичной опухоли, только 0,01% могут образовывать метастазы.

Циркулирующие опухолевые клетки обнаруживаются в частотах порядка 1-10 CTC на мл цельной крови у пациентов с метастатическим заболеванием. Для сравнения, в мл крови содержится несколько миллионов лейкоцитов и миллиард эритроцитов, см. Рисунок 1. Эта низкая частота, связанная с трудностью идентификации раковых клеток, означает, что ключевым компонентом для понимания биологических свойств КТК требуются технологии и подходы, способные выделить 1 CTC на мл крови, либо обогащением, либо, что еще лучше, с помощью анализов без обогащения, которые идентифицируют все подтипы CTC в достаточно высоком разрешении, чтобы удовлетворить диагностические требования к количеству изображений у пациентов с различными формами рака типы. До настоящего времени CTCs были обнаружены в нескольких эпителиальных раковых опухолях (молочной железы, предстательной железы, легких и толстой кишки), и клинические данные указывают на то, что пациенты с метастатическими поражениями с большей вероятностью имеют изолированные CTC.

CTCs обычно (в 2011 году) отбираются из сосудистой системы с использованием специфических антител, способных распознавать специфический опухолевый маркер (обычно EpCAM); однако этот подход обусловлен необходимостью достаточной экспрессии выбранного белка на клеточной поверхности, что необходимо для стадии обогащения. Более того, поскольку EpCAM и другие белки (например, цитокератины) не экспрессируются в некоторых опухолях и могут подавляться во время перехода от эпителия к мезенхиме ( EMT), требуются новые стратегии обогащения.

Первые данные указывают на то, что маркеры СТС, применяемые в медицине человека, сохраняются у других видов. Пять наиболее распространенных маркеров, в том числе CK19, также полезны для выявления CTC в крови собак со злокачественными опухолями молочной железы.

Более новые подходы способны идентифицировать больше клеток из 7,5 мл крови, таких как изофлюкс или мантрак.

Клиническая утилита

Рисунок 2: Анализ общей выживаемости Каплана Мейера перед началом новой линии терапии для пациентов с метастатическим раком молочной железы, колоректальным раком и раком простаты. Пациенты были разделены на пациентов с благоприятными и неблагоприятными CTC (Неблагоприятные:> 5 CTC / 7,5 мл для груди и простаты,> 3 CTC / 7,5 мл для толстой кишки)

На сегодняшний день разработано множество методов исследования для выделения и подсчета CTC. Единственной методологией, одобренной Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) для подсчета CTC в цельной крови, является система CellSearch. Обширные клинические испытания, проведенные с использованием этого метода, показывают, что наличие ХТК является сильным прогностическим фактором общей выживаемости у пациентов с метастатическим раком молочной железы, колоректального рака или рака предстательной железы, см. Рис. 2.

Методы обнаружения

Метод CellSearch

Этот метод основан на использовании наночастиц железа, покрытых полимерным слоем, несущим аналоги биотина, и конъюгированных с антителами против EpCAM для захвата CTC, и на использовании анализатора для получения изображений изолированных клеток при их окрашивании специфическим флуоресцентным антителом. конъюгаты. Кровь отбирается в пробирку с ЭДТА с добавлением консерванта. По прибытии в лабораторию 7,5 мл крови центрифугируют и помещают в систему подготовки. Эта система сначала обогащает опухолевые клетки иммуномагнитно с помощью феррофлюидных наночастиц и магнита. Затем извлеченные клетки проницаемы и окрашены ядерным красителем, конъюгатом флуоресцентного антитела против CD45.(маркер лейкоцитов) и цитокератин 8, 18 и 19 (CKs). Затем образец сканируется на анализаторе, который делает снимки ядерных, цитокератиновых и CD45 пятен. Чтобы считаться CTC, клетка должна содержать ядро, быть положительной для цитоплазматической экспрессии цитокератина, а также отрицательной для экспрессии маркера CD45 и иметь диаметр более 5 мкм. Если общее количество опухолевых клеток, признанных соответствующими вышеуказанным критериям, составляет 5 или более, образец крови является положительным. В исследованиях, проведенных на пациентах с раком простаты, молочной железы и толстой кишки, медиана выживаемости метастатических пациентов с положительными пробами составляет примерно половину медианной выживаемости пациентов с метастатической болезнью с отрицательными пробами. Эта система характеризуется восстановительной способностью 93% и пределом обнаружения одного CTC на 7,5 мл цельной крови. Несмотря на свою чувствительность и воспроизводимость, метод CellSearch требует специального оборудования для проведения анализа.

Метод эпических наук

Этот метод включает технологию отделения ядросодержащих клеток от эритроцитов, в которых отсутствует ядро. Все ядросодержащие клетки, включая нормальные лейкоциты и CTC, подвергаются воздействию антител с флуоресцентной меткой, специфичных для биомаркеров рака. Кроме того, система визуализации Epic делает снимки всех ячеек на слайде (приблизительно 3 миллиона), записывает точные координаты каждой ячейки и анализирует каждую ячейку на предмет 90 различных параметров, включая интенсивность флуоресценции четырех флуоресцентных маркеров и 86 различных морфологические показатели. Epic также может использовать FISHи другие методы окрашивания для поиска отклонений, таких как дублирования, удаления и перегруппировки. Технология обработки изображений и анализа также позволяет узнать координаты каждой ячейки на слайде, чтобы из слайда можно было извлечь одну ячейку для анализа с использованием секвенирования следующего поколения. Обученный гематопатологии алгоритм включает в себя многочисленные морфологические измерения, а также экспрессию цитокератина и CD45. Затем алгоритм предлагает CTC-кандидаты, подтвержденные обученным читателем. Представляющие интерес клетки анализируют на наличие соответствующих фенотипических и генотипических маркеров, с региональными лейкоцитами, включенными в качестве отрицательных контролей. Молекулярные анализы Epic измеряют экспрессию белка, а также исследуют геномные аномалии в CTCs для более чем 20 различных типов рака.

Maintrac

Maintrac - это диагностическая платформа, использующая микроскопические методы для выявления редких клеток в жидкостях организма и их молекулярных характеристик.

Что касается циркулирующих опухолевых клеток, Maintrac использует подход, основанный на микроскопической идентификации циркулирующих опухолевых клеток. Чтобы предотвратить повреждение и потерю клеток во время процесса, maintrac использует только два шага в направлении идентификации. В отличие от многих других методов, maintrac не очищает клетки и не обогащает их, но идентифицирует их в контексте других соединений крови. Чтобы получить жизненно важные клетки и уменьшить стресс этих клеток, клетки крови получают только одним этапом центрифугирования и лизиса эритроцитов. Как и CellSearch, maintrac использует антитело EpCAM. Однако он используется не для обогащения, а скорее как флуоресцентный маркер для идентификации этих клеток. Вместе с окрашиванием ядер йодидом пропидия метод Майнтрака позволяет различать мертвые и живые клетки. Только жизненно важно, пропидий, исключая EpCAM-положительные клетки, считаются потенциальными опухолевыми клетками. Только живые клетки могут перерасти в опухоли, поэтому отмирание EpCAM-положительных клеток не может причинить вреда. Суспензия анализируется с помощью флуоресцентной микроскопии, которая автоматически подсчитывает события. Одновременно регистрируются галереи событий, чтобы проверить, нашла ли программа истинную живую клетку, и, например, провести различие между эпителиальными клетками кожи. Тщательная проверка метода показала, что дополнительные антитела к цитокератинам или CD45 не имеют каких-либо преимуществ. Одновременно регистрируются галереи событий, чтобы проверить, нашла ли программа истинную живую клетку, и, например, провести различие между эпителиальными клетками кожи. Тщательная проверка метода показала, что дополнительные антитела к цитокератинам или CD45 не имеют каких-либо преимуществ. Одновременно регистрируются галереи событий, чтобы проверить, нашла ли программа истинную живую клетку, и, например, провести различие между эпителиальными клетками кожи. Тщательная проверка метода показала, что дополнительные антитела к цитокератинам или CD45 не имеют каких-либо преимуществ.

В отличие от других методов, Maintrac не использует подсчет отдельных клеток в качестве прогностического маркера, скорее, Maintrac использует динамику подсчета клеток. Увеличение количества опухолевых клеток является важным фактором, что опухолевая активность продолжается. Уменьшение количества клеток является признаком успешной терапии.

Следовательно, maintrac можно использовать в следующих ситуациях:

  • Для проверки успешности химиотерапии и
  • контролировать лечение во время гормональной или поддерживающей терапии

Циркулирующие опухолевые клетки как ранняя диагностика рецидива рака:

Исследования показали, что при определенных обстоятельствах в крови можно обнаружить также положительные по EpCAM клетки. Воспалительные заболевания, такие как Morbus Crohn или Colitits Ulcerosa, также показывают повышенный уровень EpCAM-положительных клеток. Пациенты с серьезными ожогами кожи также могут нести положительные по EpCAM клетки в крови, что может искажать результаты. Поэтому использование положительных клеток EpCAM в качестве инструмента для ранней диагностики не рекомендуется.

Тест ISET

Тест ИСЕТИ ( я solation от S IZ е из Т umor клеток / клетки трофобласта) представляет собой диагностический тест крови, который обнаруживает циркулирующий опухолевые клетки в образце крови. В этом тесте используется диагностическаясистема in-vitro, разработанная в INSERM, Парижском институте медицинских исследований и помощи больницам Парижа (AP-HP), для того, чтобы изолировать раковые клетки от крови без потерь и идентифицировать их. через диагностический цитопатологический подход.

Другие методы

КТК имеют решающее значение для понимания биологии метастазирования и обещают потенциал в качестве биомаркера для неинвазивной оценки прогрессирования опухоли и реакции на лечение. Тем не менее, выделение и характеристика CTC представляют собой серьезную технологическую проблему, так как CTC составляют минимальное количество всех клеток в циркулирующей крови, 1-10 CTCs на мл цельной крови по сравнению с несколькими миллионами лейкоцитов и миллиардом красной крови клетки. Таким образом, основной проблемой для исследователей СТС является преобладающая сложность очистки СТС, которая позволяет проводить молекулярную характеристику СТС. Было разработано несколько методов для выделения СТС в периферической крови, которые по существу делятся на две категории: биологические методы и физические методы.

  • Биологические методы представляют собой разделение, основанное на связывании антиген-антитело. Используются антитела против специфических для опухоли биомаркеров, включая EpCAM, Her2, PSA. Наиболее распространенным методом является магнитное разделение на основе наночастиц (иммуномагнитный анализ), который используется в CellSearch или MACS. Другие изучаемые методы включают микрофлюидное разделение и комбинацию иммуномагнитного анализа и микрофлюидного разделения. По мере развития технологии микропроизводства внедряются микромасштабные магнитные структуры, которые обеспечивают лучший контроль магнитного поля и помогают обнаружению CTC. Онколитические вирусы, такие каквирусы коровьей оспы, разработаны для обнаружения и идентификации CTCs.
  • Физические методы часто основаны на фильтрах, что позволяет собирать CTC по размеру. ScreenCell - это устройство на основе фильтрации, которое позволяет за несколько минут обеспечить чувствительную и специфическую изоляцию CTC от цельной крови человека. Периферическая кровь отбирается и обрабатывается в течение 4 часов с помощью устройства для выделения ScreenCell для захвата CTC. Захваченные клетки готовы для клеточной культуры или для прямой характеристики с использованием анализа гибридизации ViewRNA in situ.

Другой подход заключается в захвате КТК GILUPI GmbH in vivo. Покрытый антителом металлический провод вводится в периферическую вену и остается там в течение определенного периода (30 минут). В течение этого времени CTC из крови могут связываться с антителами (в настоящее время анти-EpCAM). По истечении времени инкубации проволоку удаляют, промывают и нативные CTC, выделенные из крови пациента, могут быть дополнительно проанализированы. Молекулярная генетика, а также иммунофлуоресцентное окрашивание и несколько других методов возможны. Преимущество этого метода заключается в более высоком объеме крови, который можно анализировать на наличие СТС (приблизительно 750 мл за 30 минут по сравнению с 7,5 мл взятого образца крови). Чувствительный метод двойного градиентного центрифугирования и магнитной сортировки и обнаружения и подсчета был использован для обнаружения циркулирующих клеток эпителиального рака у пациентов с раком молочной железы с помощью нового метода отрицательного отбора. Аналогичная методология была использована для выявления циркулирующих клеток рака простаты.

Исследователи в Массачусетской больнице общего профиля разработали субтрактивный гибридный подход для обнаружения и сбора CTC, который работает путем удаления большинства не-CTC клеток из образца, оставляя CTC. Он делает это частично, сначала удаляя клетки, слишком маленькие для того, чтобы быть КТК, такие как эритроциты, затем связывая магнитные частицы с лейкоцитами и разделяя их магнитным способом. Получившаяся компактная и автоматизированная конструкция называется CTC-iChip, которая может сортировать CTC быстро и практически для любого типа рака.

Методы удаления

Онкоферез (машинный диализ)

Нормальные клеточные компоненты крови в основном состоят из эритроцитов (эритроцитов), лейкоцитов (лейкоцитов или лейкоцитов) и тромбоцитов. КТК представляют собой аномальные компоненты клеток крови, выделяемые из опухолей, и неизменно собираются из периферической крови пациента, даже если они присутствуют во всей системе кровообращения. Поскольку все кровяные клетки должны проходить через чрезвычайно узкие капилляры, поскольку они циркулируют по организму, CTCs в периферической крови обнаруживаются в чрезвычайно низких количествах, потому что они должны циркулировать и выживать в сложных условиях, таких как сердце, легкие и капилляры, прежде чем они могут появиться в периферической крови. Помимо размера и количества, другой важной характеристикой клеток крови является их деформируемость: способность изменять форму для прохождения через узкие капилляры, которые отделяют артериальную кровь (кровь, откачиваемую сердцем) от венозной крови (кровь, возвращающаяся к сердцу после прохождения через капилляр). Известно, что эритроциты являются очень деформируемыми, эффективно и очень быстро меняют форму от пончика до колбасы, когда они проходят через капилляры. Тромбоциты и лейкоциты менее деформируемы, чем эритроциты; но они, тем не менее, должны и проходят через капилляры, хотя и медленнее. КТК являются наименее деформируемым типом клеток крови на несколько порядков. Пока нет утвержденных методов, но эффективно и очень быстро изменяя форму от пончика до колбасы, когда они проходят через капилляры. Тромбоциты и лейкоциты менее деформируемы, чем эритроциты; но они, тем не менее, должны и проходят через капилляры, хотя и медленнее. КТК являются наименее деформируемым типом клеток крови на несколько порядков. Пока нет утвержденных методов, но эффективно и очень быстро изменяя форму от пончика до колбасы, когда они проходят через капилляры. Тромбоциты и лейкоциты менее деформируемы, чем эритроциты; но они, тем не менее, должны и проходят через капилляры, хотя и медленнее. КТК являются наименее деформируемым типом клеток крови на несколько порядков. Пока нет утвержденных методов, ноViatar CTC Solutions проходит клинические испытания на людях с помощью специальной системы механической фильтрации в течение 4-часового сеанса для полного диализа CTC из крови.

Характеристика

Любой полезный метод для выделения CTCs должен позволять (i) их идентификацию и подсчет и (ii) их характеристику с помощью иммуноцитохимии, флуоресцентного анализа in situ (FISH) ДНК и РНК и всех других соответствующих молекулярных методов с использованием ДНК и РНК. Когда циркулирующие опухолевые клетки отбираются из крови с использованием фильтрующих устройств (таких как изолирующее устройство ScreenCell), требуется дальнейшая морфологическая и молекулярная характеристика, чтобы выявить важную прогностическую информацию и сообщить об изменениях в биологии СТС, например, во время рецидива опухоли. Анализ ViewRNA для характеристики CTCs является единственной гибридизированной in situ технологией, которая позволяет обнаруживать многоцелевую РНК с одной молекулой любой РНК-мишени. Исключительная чувствительность и специфичность достигается за счет использования запатентованной конструкции зонда, одновременной амплификации сигнала с разветвленной ДНК (bDNA) и подавления фона.

Характеристика CTCs с использованием ViewRNA для мультиплексного анализа РНК in situ

Захваченные CTC на фильтрующей мембране устройства для выделения ScreenCell переносят в 24-луночный планшет для культивирования клеток для подсчета / определения характеристик с использованием анализа клеток ViewRNA ISH. Набор специфических для мишени зондов, содержащий 20 олигонуклеотидных пар, гибридизуется с целевой РНК. Событие гибридизации олигопары является существенным для поддержки структуры усиления сигнала, которая собирается последовательными этапами гибридизации. Каждая полностью собранная амплификационная структура содержится в пределах 40-50 п.н. РНК-мишени со способностью к 400-кратной амплификации сигнала. Следовательно, типичный набор специфичных для мишени зондов (содержащий 20 олигопар) может генерировать 8000-кратное усиление сигнала в месте расположения целевой РНК.

Дальнейшая характеристика

Некоторые лекарства особенно эффективны против рака, который соответствует определенным требованиям. Например, Герцептин очень эффективен у пациентов с положительным результатом Her2, но гораздо менее эффективен у пациентов с отрицательным значением Her2. Как только первичная опухоль удалена, биопсия текущего состояния рака посредством традиционного типирования тканей больше невозможна. Часто для типирования используются срезы тканей первичной опухоли, удаленные за несколько лет до этого. Дальнейшая характеристика CTC может помочь определить текущий фенотип опухоли. Анализы FISH были проведены на CTC, а также на определение статуса IGF-1R, Her2, Bcl-2, [ERG (ген) | ERG], PTEN, AR с использованиемиммунофлюоресценция. КПЦР на уровне отдельных клеток также может быть выполнена с CTC, выделенными из крови.

Морфологическое определение

Морфологический внешний вид оценивается человеком-оператором и, следовательно, подвержен большим различиям между операторами. Существует несколько методов подсчета CTC, в которых для идентификации CTC используется морфологический вид, который также может применять различные морфологические критерии. Недавнее исследование рака предстательной железы показало, что многие различные морфологические определения циркулирующих опухолевых клеток имеют сходную прогностическую ценность, хотя абсолютное количество клеток, обнаруженных у пациентов и нормальных доноров, варьировалось более чем на десятилетие между различными морфологическими определениями

Ссылка на основную публикацию
Adblock detector